大家好，今天给大家分享一篇最近发表在CellChemicalBiology上的文章，题目是“ValidationandInvalidationofChemicalProbesfortheHumanN-myristoyltransferases”,文章的通讯作者是英国帝国理工学院的Tate教授。他的研究兴趣在化学生物学和化学蛋白质组学领域，包括蛋白/多肽的化学修饰与合成以及药物化学。

蛋白质上的豆蔻酰化是指将14个碳的豆蔻酸修饰在N端的甘氨酸上的过程。这种蛋白质上的翻译后修饰主要发生在核糖体上，并且在人体中是由豆蔻酰基转移酶（N-myristoyltransferases，NMTs）催化完成豆蔻酰化。豆蔻酰化的蛋白在病原体的入侵过程中起着重要的生理功能，因此NMTs是抗病毒、寄生虫和真菌感染过程中的重要药物靶点。目前使用最广泛的NMTs抑制剂有五种，分别是IMP-(化合物1)、IMP-(化合物2)、2-hydroxymyristicacid(化合物3),D-NMAPPD(化合物4)和Tris-DBApalladium(化合物5)。其中化合物1和2已经被X射线晶体结构证明对NMTs1和NMTs2有很高的亲和能力和选择性，化合物3是豆蔻酸的类似物，化合物4是一种溶酶体酸性神经酰胺酶的抑制剂，被推测能够通过14个碳的豆蔻酸与NMTs作用，化合物5被报道除了有抗肿瘤活性外也能抑制NMTs。作者在本文中从细胞毒性、豆蔻酸修饰组学、酶活、蛋白合成以及细胞周期等方面系统的评价了这五种针对NMTs化学探针的优缺点。

首先，作者通过检测豆蔻酰化过程的副产品辅酶A测试五种化学探针对重组的人豆蔻酰基转移酶的抑制效果。发现化合物1和2能抑制NMTs的活性，化合物5能部分抑制NMTs的活性，但此浓度下化合物已经在溶液中形成沉淀。随后通过化合物1-5对乳腺癌细胞（MDA-MB-）和Hela的毒性实验（包括细胞核计数和细胞代谢活力），化合物3毒性最低，化合物5毒性最大，但不影响悬浮细胞Jurkat的活力，说明毒性来源沉淀的结晶体与细胞的相互作用。随和作者测试了五种抑制剂对MDA-MB-细胞的豆蔻酰化、NMTs表达和NMTs底物ARL1蛋白的豆蔻酰化的影响。结果发现化合物1和2能有效的抑制细胞内的豆蔻酰化和ARL1蛋白上的豆蔻酰化，化合物3-5去没有明显的抑制效果。五种化合物均不影响NMTs1和NMTs2在细胞内的表达。

作者还在活细胞蛋白质组学水平上检测了五种化合物对蛋白质上的豆蔻酰化进行定量分析，同样发现化合物1和2能明显降低蛋白上的豆蔻酰化修饰，化合物3-5却没有类似效果。最后作者测试了五种化合物对蛋白质的合成、细胞周期以及细胞凋亡的影响，数据显示化合物4和5能明显抑制细胞内蛋白质的合成，并且改变细胞的周期。其中化合物5还能明显导致细胞发生凋亡。化合物1-3对细胞内的蛋白质的合成、细胞周期以及细胞凋亡没有明显影响。作者认为化合物1和2是目前已知最好的NMTs抑制剂，化合物3-5不能抑制NMTs的酶活，并且在细胞毒性和off-target方面也不是合适的NMTs抑制剂。

总之，本文系统评价多种豆蔻酰基转移酶的抑制剂效果，发化合物IMP-和IMP-是目前人豆蔻酰基转移酶最合适的一类抑制剂。

原文作者：TH

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